大鼠氣管和支氣管組織提取物 說明書

產品描述：
大鼠氣管和支氣管組織提取物 【Rat Airway: Normal Bronchial and Tracheal Derivatives】
      大鼠氣管和支氣管組織提取物 說明書氣管和支氣管是連接喉與肺之間的管道，均以“C”型的透明軟骨為支架，以保持其開放狀態，相鄰軟骨之間借韌帶連接。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠氣管和支氣管組織中高質量的總RNA，PCR準備的*條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及0mg總RNA。68℃反應0min 后終止RT反應。利用x RT Buffer 運輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證產品的質量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

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技術傳授:
凍存培養基
大鼠氣管和支氣管組織提取物 說明書凍存細胞時必須使用的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養基。
）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養基，含0% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案
以下實驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 
.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數器、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約00-200×g的離心力將細胞懸液離心5至0分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  °C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 

細胞可重發跟不可重發：
可以重發的情況有哪些？
（）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發；
（2）凍存的細胞復蘇后，絕大多數細胞未存活，重發；
（3）存活的細胞靜置24小時后，絕大多數細胞未存活，重發；
（4）凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封，出現污染，重發；
（5）視具體情況而定。
大鼠氣管和支氣管組織提取物 說明書出現問題，不予以重發的情況有哪些？
（）客戶造成細胞污染，不重發；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；
（3）細胞狀態不好，未細胞培養前3天照片的，不重發；
（4）細胞培養時經其它處理的，不重發；
（5）細胞收到2天內，未告知，不重發；
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