腎上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物說明書

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產(chǎn)品描述：
腎上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物【Human Kidney MatchPair?: Normal Renal Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】
     腎上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物說明書人腎上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物是從人腎上皮細胞和腫瘤細胞中提取的，人腎上皮細胞和腫瘤細胞分別從正常人腎組織和腫瘤組織中制備。正常人腎組織和腫瘤組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及0mg總RNA。68℃反應0min 后終止RT反應。利用x RT Buffer 運輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學；<6>芯片研究與表達圖譜。
技術傳授:
凍存培養(yǎng)基
腎上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物說明書凍存細胞時必須使用的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含0% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約00-200×g的離心力將細胞懸液離心5至0分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  °C?；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
以下是腎上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物說明書的相關產(chǎn)品：

兔抗NOS3多克隆抗體 英文名：Anti-NOS3 (Ab-77) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗ZAP70多克隆抗體 英文名：Anti-ZAP70 (Ab-39) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗PLCG2多克隆抗體 英文名：Anti-PLCG2 (Ab-753) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗YWHAZ多克隆抗體 英文名：Anti-YWHAZ(Ab-58) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗SMCA多克隆抗體 英文名：Anti-SMCA (Ab-957) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗BCR多克隆抗體 英文名：Anti-BCR (Ab-77) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗RPS6KA5多克隆抗體 英文名：Anti-RPS6KA5 (Ab-376) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗GABRB多克隆抗體 英文名：Anti-GABRB (Ab-434) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗VASP多克隆抗體 英文名：Anti-VASP (Ab-57) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗PTK2B多克隆抗體 英文名：Anti-PTK2B (Ab-402) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗STMN多克隆抗體 英文名：Anti-STMN (Ab-25) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

兔抗MET多克隆抗體 英文名：Anti-MET (Ab-234) rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃）

腎上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物說明書Leonurine hydrochloride 鹽酸益母草堿 24697-74-3  20mg

EDTA Na2 乙二胺四乙酸二鈉 kg  瓶

Lipase 脂肪酶 5g  瓶

Indole-3-butyricacid(IBA) 吲哚-3-丁酸(水溶) g  瓶

Cy3 5 mg  支

2ml凍存盒 8孔  個

Melatonin 褪黑素 25g  瓶

結晶紫染色液(%) 0ml  瓶

高速增感屏 8×0  盒

BCIP-NBT底物顯色試劑盒 25ml  瓶

Trion X-00 曲拉通X-00 00ml  瓶

細胞可重發(fā)跟不可重發(fā)：
可以重發(fā)的情況有哪些？
（）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
（2）凍存的細胞復蘇后，絕大多數(shù)細胞未存活，重發(fā)；
（3）存活的細胞靜置24小時后，絕大多數(shù)細胞未存活，重發(fā)；
（4）凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；
（5）視具體情況而定。
腎上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物說明書出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）細胞狀態(tài)不好，未細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（4）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（5）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；