人子宮成纖維細(xì)胞提取物說明書

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產(chǎn)品描述：
人子宮成纖維細(xì)胞提取物【Human Uterine: Normal Uterine Fibroblast Derivatives】
     人子宮成纖維細(xì)胞提取物說明書人子宮成纖維細(xì)胞提取物是從人子宮成纖維細(xì)胞提取的，人子宮成纖維細(xì)胞從正常人子宮組織制備。正常人子宮組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及0mg總RNA。68℃反應(yīng)0min 后終止RT反應(yīng)。利用x RT Buffer 運輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應(yīng)用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。
技術(shù)傳授:
凍存培養(yǎng)基
人子宮成纖維細(xì)胞提取物說明書凍存細(xì)胞時必須使用的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含0% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約00-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至0分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  °C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
以下是人子宮成纖維細(xì)胞提取物說明書的相關(guān)產(chǎn)品：

CD3 / ANPEP 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

BLyS / TNFSF3B 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

UCP 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 µg

IFNA5 / IFNaG 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

IL3RA2 / CD23A2 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

CD50 / ICAM-3 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

MOG 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 µg

Cadherin-6 / K-Cadherin / CDH6 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 µg

PIGR / Poly-Ig receptor 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

LRWD 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB   IP    50 µg

人子宮成纖維細(xì)胞提取物說明書鄰二甲分子式：06.7英文名稱：Ortho xylene：95-47-6分子量： C8H0； H3C-(C6H4)-CH3

2,4-二氯噻吩[2,3-D]嘧分子式：205英文名稱：2,4- two [2,3-D]：8740-39-分子量： C6H2Cl2N2S

3,6-二溴-9-乙咔唑分子式：353.06英文名稱：3,6- dibromo -9- ethylcarbazole：33255-3-9分子量： C4HBr2N

2--3-甲-5-氟吡分子式：26.35832英文名稱：2- amino -3- -5-：886365-56-6分子量： C6H7FN2

5-硝水醛英文名稱：5- nitro group分子式：67.2分子量： C7H5NO4：97-5-8

3--5-甲氧異吡分子式：49.英文名稱：3- amino -5-, a：045855-60-4分子量： C7H7N3O

2-乙萘分子式：52.2英文名稱：2- ethyl naphthalene：2949-26-0分子量： C2H8

氯聯(lián)分子式：36.57英文名稱：Chlorine iodine：483-72-3分子量： C2H0ClI

甲鈣黃綠素藍水合物[用于配位滴定銅時的指示劑]英文名稱：Methyl calcein blue [indicator for complexometry分子式：277.28分子量： C4H5NO5·xH2O：8028-96-8

2-硫甲并咪唑分子式：64.23英文名稱：2- thiol methyl benzimidazole：53988-0-6分子量： C8H8N2S

細(xì)胞可重發(fā)跟不可重發(fā)：
可以重發(fā)的情況有哪些？
（）細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
（2）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā)；
（3）存活的細(xì)胞靜置24小時后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā)；
（4）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時后并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；
（5）視具體情況而定。
人子宮成纖維細(xì)胞提取物說明書出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）細(xì)胞狀態(tài)不好，未細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；