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    技術(shù)文章

    Elisa試劑盒使用前的對照*
    點(diǎn)擊次數(shù):651 更新時間:2020-03-17
          Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)固相載體的挑選:很多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。
      包被抗體(或抗原)的挑選:將抗體(或抗原)吸附在固相載體外表時,請求純度要好,吸附時一般請求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時刻及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃ 8~24小時。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌效果,應(yīng)留意防護(hù)。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體,在運(yùn)用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反響,調(diào)查其顯色反響是不是均一性,據(jù)此判明其吸附性能是不是杰出。正式實(shí)驗(yàn)時,應(yīng)別離以陽性對照與陰性對照操控實(shí)驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以確保實(shí)驗(yàn)成果的性。
      在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的挑選是很主要的,其間包含:
      有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是現(xiàn)在較為滿足的供氫體。底物效果一段時刻后,應(yīng)參加強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以停止反響。一般底物效果時刻,以0-30分鐘為宜。底物運(yùn)用液必須新鮮,尤其是H2O2在臨用前參加。然后再固定其它條件或采納“方陣法”(包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體別離為不一樣的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)體系里地滴定其作業(yè)濃度。有時本底較高,闡明有非特異性反響,可選用羊血清、兔血清或BSA等封閉。酶的底物及供氫體的挑選:對供氫體的挑選請求是價廉、安全、有明顯地顯色反響,而自身無色。蛋白質(zhì)包被的較適濃度需進(jìn)行滴定:即用不一樣的蛋白質(zhì)濃度(0.、.0和0μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它實(shí)驗(yàn)條件相同時,調(diào)查陽性標(biāo)本的OD值。挑選OD值zui大而蛋白量起碼的濃度。關(guān)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說一般為~0μg/ml。ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)酶符號抗體作業(yè)濃度的挑選:首先用直接ELISA法進(jìn)行開始效價的滴定(見酶符號抗體部份)。

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