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    Elisa試劑盒中一般有三次加樣步驟
    點擊次數:630 更新時間:2020-02-04
          Elisa試劑盒中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結合物,加底物。加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留意不行濺起,不行產生氣泡。
      在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反響的完結需要有一定的溫度和時刻,這一保溫進程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當。
      加標本一般用微量加樣器,按規則的量參加板孔中。每次加標本應更換吸嘴,避免發作交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液,ELISA試劑盒再在其間參加血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩分鐘以保 證混和。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器,使加液進程迅速完結。
      ELISA屬固相,抗原、抗體的結合只在固相表面上發作。
      以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結合的時機,只要貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個逐步平衡的進程,因而需經分散才能達到反響的結尾。在其后參加的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這便是為什么ELISA反響總是需要一定時刻的溫育。
      溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA試劑盒辦法作反響動力學研究時,實驗標明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經-2小時,ELISA檢測試劑盒產物的生成可達。為加速反響,可提高反響的溫度,有些實驗在43℃進行,但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為*,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中,以構成多的沉淀。但因所需時刻太長,在ELISA中一般不予選用。

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